皖仪离子色谱检测核酸中乙酸、二氯乙酸的残留量_安徽皖仪科技股份有限公司

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皖仪离子色谱检测核酸中乙酸、二氯乙酸的残留量

FABIAORIQI: 2020-06-15     DIANJIJISHU:713



皖仪离子色谱检测核酸中乙酸、二氯乙酸的残留量

     核酸是一类生物聚合物,是所有已知生命形式必不可少的组成物质。核酸是脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的总称。



    2020年新冠病毒疫情大爆发,“核酸检测”是经常出现在人们视野的名词,核酸检测的物质是病毒的核酸。核酸检测是查找患者的呼吸道标本、血液或粪便中是否存在外来入侵的病毒的核酸,来确定是否被新冠病毒感染。因此一旦检测为核酸“阳性”,即可证明患者体内有病毒存在。



     核酸最早于1869年由瑞士医生和生物学家Friedrich Miescherf分离获得,称为Nuclein。随着科技的进步,核酸的实验研究构成了现代生物学和医学研究的重要组成部分,并为基因组和法医学以及生物技术和制药工业奠定了基础



     人工合成基因促进了基因工程的发展。核酸合成包括化学合成和酶促合成两个方面,其中化学合成过程中用到很多化学试剂,乙酸和二氯乙酸就是其中比较常见的两种试剂。但乙酸和二氯乙酸的残留量影响核酸的纯度及性能,因此检测乙酸和二氯乙酸的残留量对核酸的合成与纯化具有重要意义。



     目前检测核酸中二氯乙酸及乙酸的方法有很多,常用的有气相色谱法和离子色谱法,其中离子色谱法因其操作简单、选择性高,灵敏度高等越来越多得到广泛应用。本文主要介绍离子色谱法测定核酸中乙酸及二氯乙酸的残留量。




离子色谱检测核酸中乙酸及二氯乙酸残留量


1   色谱条件



色谱柱:Dionex IonPac AS194×250mm
柱温:25℃
抑制器:阴离子抑制器
电流:120mA
检测器:电导检测器
池温:30℃
进样量:25μL(无损)
淋洗液:KOH梯度淋洗,梯度程序见下表

KOH淋洗液梯度表

时间(min)

浓度(mmol/L)

0

5.00

18

5.00

30

45.0

30.1

5.00

40

 5.00 




 2   仪器配置


离子色谱仪:IC6200,配有抑制型电导检测器;
自动进样器:AS3100;
淋洗液发生器:EG6100  OH-型;


 3   参考谱图



  标准曲线


标准曲线浓度表(μg/mL)

离子名称

1

2

3

4

5

乙酸

0.100

0.500

1.00

2.00

5.00

二氯乙酸

0.100

0.500

1.00

2.00

5.00 



测定下限

乙酸0.05μg/mL,二氯乙酸0.05μg/mL


序号

化合物名

保留时间

峰面积

峰高

分离度

拖尾因子

理论塔板数

信噪比

1

乙酸

10.6

7.212

0.369

21.738

1.168

7498

136.719

2

二氯乙酸

23.112

1.518

0.061

--

0.777

19528

22.737


干扰排除


序号

化合物名

保留时间

峰面积

分离度

拖尾因子

理论塔板数

信噪比

1

F

9.229

70.562

3.503

1.226

9575

1622.679

2

乙酸

10.705

9.866

15.84

1.072

8476

189.55

3

Cl

20.521

84.572

5.083

1.162

11237

1011.108

4

二氯乙酸

23.667

3.985

1.966

1.156

41696

78.958

5

NO2

24.581

252.329

--

1.13

44559

4877.605

YISUAN、ERLVYISUANDEFENXIZAIGAISEPUTIAOJIANXIABUSHOUGANRAO。

 样品谱图


为什么需要梯度洗脱呢?

   1.样品中其他强保留物质需高浓度淋洗液洗脱,一方面减少分析时间,另外一方面保护色谱柱,减少强保留物质残留于色谱柱上,造成色谱柱污染。

   2.等度洗脱时,目标离子峰受到杂质离子干扰,不能达到基线分离,满足不了分析要求。